Transwell迁移、侵袭实验

Transwell实验是一种体外研究细胞迁移和侵袭能力的经典方法，其核心是通过多孔膜分隔上下腔室，模拟细胞在趋化因子梯度下的跨膜运动。迁移实验评估细胞定向运动能力，而侵袭实验需额外包被基质胶（如Matrigel）以模拟细胞外基质（ECM），检测细胞降解基质并穿透膜的能力。广泛应用于肿瘤转移、免疫细胞趋化、药物筛选及细胞间相互作用等领域。

  1、若为侵袭实验，Transwell膜面加Matrigel。在4℃条件下（冰上操作）将Matrigel胶用无血清的细胞培养基进行稀释。取50-100μl添加到Transwell小室，37℃培养箱中孵育3 h使其凝胶化；
  2、取对数生长期细胞用0.25%胰酶消化细胞，等待细胞变圆后收集细胞，1000rpm离心3min，离心后弃去上清，用PBS洗1遍，接着用无血清培养基悬浮细胞，调整细胞密度至1×10^5cells/ml；
  3、在24孔板下室加入500μL含10% FBS或趋化因子的培养基，然后用镊子将Transwell小室置于24孔板内，取细胞悬液200μL加入上室，最后放入培养箱中培养24 h；
  4、用镊子小心取出小室，吸干上室培养基，用棉签轻轻擦拭上室内的细胞，取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL，将小室放入后室温固定30min；
  5、取出小室，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl 0.1%结晶紫的孔中，室温染色20min。取出小室，用PBS轻柔清洗2次，除去未与细胞结合的结晶紫；
  6、显微镜下进行观察和拍照，随机选取5个视野，计数呈紫色的阳性细胞。

 1、团队经验丰富，成员稳定；
 2、提供原始数据以及试验记录，保证数据真实可靠；
 3、实验进行三重复，保证数据的可重复性。