蛋白互作：双分子荧光互补实验 BiFC

▲ 双分子荧光互补（BiFC）原理示意图

  BiFC是一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的相互作用和定位的技术。将荧光蛋白分成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），然后N-fragment和C-fragment分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生互作，则N-fragment和C-fragment在空间上靠近，就会形成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。若A与B蛋白无互作，则不能被激发岀荧光。

▲ 双分子荧光互补（BiFC）实验流程图

  ①构建表达载体：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定；；
  ②转化农杆菌：将目的载体转化到农杆菌菌株内，例如：GV3101；
  ③混注烟草：将含有N-fragment与C-fragment的农杆菌菌液按照比例混匀，共同注射本氏烟叶片；
  ④激光共聚焦观察实验结果并拍照记录。

  双分子荧光互补技术服务范畴：验证两个已知蛋白质间的相互作用
  技术服务优势：
  ①团队经验丰富；
  ②提供原始图片，保证数据真实可靠；
  ③该技术得到的蛋白互作关系符合体内实际情况，结果可信度高。